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PCR的检测下限是M. capricolum 1ng, M. hyopneumoniae和U. urealyticum 100pg、其他的Mycoplasma是10pg。 但是Human DNA、Mouse DNA在100 ng时有非特异性片段扩增。
- 知乎 RT—PCR检测技术的原理是什么? RT—PCR检测技术的原理是什么? 进行qPCR,加入DNA聚合酶,buffer,引物,探针。 探针本身是一段DNA序列,能结合到病毒RNA反转录后的基因组上。 探针上的荧光基团和淬灭基团靠近,荧光基团无法发出荧光 PCR反应一轮,聚合酶合成DNA的时候路过探针会把探针切开,荧光基团和淬灭基团分开,荧光基团发出荧光。 如果是阴性样品,探针结合不上去,酶没办法切开探针,荧光基团不能发光。 RT-PCR 就是逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录 PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
1983年,Kary B. Mullis提出了PCR技术的构想, 1985年,他们在Science发表了相关的论文。 论文由Mullis的同事Randall K. Saiki领衔发表,1988年Saiki等分离纯化了Taq DNA聚合酶,并将其应用于PCR反应,使PCR变得更加简单、易行和稳定,随后PCR技术迎来了蓬勃发展的时期。