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间接ELISA实验的缺点是存在交叉反应的可能性(酶标二抗直接与抗原结合),可能会增加背景,同时与直接ELISA相比,间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤,实验周期延长。 先将捕获抗体固定于ELISA板孔中,然后加入样品,接着加入检测抗体。
竞争法ELISA一般用于检测小分子抗原。 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,无法同时与两种抗体结合因此不能用双抗体夹心法进行测定,故可以采用竞争法模式。 一般常用于小分子、lgA、lgG、lgM等检测。
但是由于直接ELISA的抗原不是特异性固定的,样本中的靶蛋白及其他杂质蛋白都会与ELISA板结合,实验背景会比较高。 而且直接ELISA每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗,实验不太灵活。